QPCR 의 표준 곡선을 만드는 방법
자세한 내용은 다음과 같습니다.
PCR-ELISA 방법:
디곡신이나 바이오틴을 표기 유인물로 사용하여 증강산물은 고상판의 특이성 탐침에 의해 결합된다.
그런 다음 항디곡신이나 바이오틴화 항체-매운 뿌리 과산화물 효소 접합물을 첨가하고, 마지막 효소는 밑바닥을 빛나게 한다.
일반적인 PCR-ELISA 는 질적 실험일 뿐, 내표를 추가해 표준곡선을 만들어도 정량검사 목적을 달성할 수 있다.
일련의 알려진 성분의 표준 물질의 어떤 이화 성질을 측정하여 이 성질의 수치로 구성된 곡선을 얻었다.
확장 데이터:
실시간 형광 정량 PCR 기술, PCR 반응체계에 형광기단을 넣고 형광신호의 축적을 통해 전체 PCR 프로세스를 실시간으로 모니터링한 후, 마지막으로 표준 곡선을 통해 알 수 없는 템플릿을 정량적으로 분석합니다.
테스트 방법:
1, SYBRGreen 방법:
PCR 반응체계에 과도한 SYBR 형광염료를 첨가하고, SYBR 형광염료는 특이하게 DNA 쌍체인에 섞은 후 형광신호를 보낸다.
체인에 섞이지 않은 SYBR 염료 분자는 형광 신호를 보내지 않으므로 형광 신호의 증가가 PCR 제품의 증가와 완전히 동기화되도록 합니다.
SYBR 정량 PCR 증폭 형광 곡선, PCR 산물 해체 곡선 (단일 피크 그래프는 PCR 증폭 산물의 특이성을 나타냄).
2.TaqMan 프로브 방법:
프로브가 완성되면, 보고 기단에서 방출되는 형광 신호는 담금질기에 흡수된다.
PCR 증폭 과정에서 Taq 효소의 5'-3' 핵산 외체효소 활성분해 프로브를 보고하고 형광기단과 형광기단을 분리해 형광감지시스템이 형광신호를 받을 수 있도록 한다.
즉, 각 DNA 사슬은 형광 분자를 형성하기 위해 증폭되어 형광 신호의 축적과 PCR 생성물의 형성 사이의 완전한 동기화를 달성합니다.
PCR 반응의 첫 번째 15 순환의 형광 신호를 형광 배경 신호로 사용하고, 기본값은 형광 임계값을 3- 15 순환 형광 신호 표준 편차의 10 배, 즉 임계값 =/KLOC-0-0 으로 설정합니다.
알려진 초기 복사 수를 사용하는 표준품을 사용하여 표준 커브를 만들 수 있습니다. 여기서 가로좌표는 초기 복사 수의 로그를 나타내고 세로좌표는 Ct 값을 나타냅니다. 따라서 알 수 없는 샘플의 Ct 값만 얻으면 표준 곡선에서 샘플의 초기 복사 수를 계산할 수 있습니다.
참고 자료:
Baidu 백과 사전-실시간 형광 정량
바이두 백과-표준 곡선