효소특이적 동정시험
실험 목적
1. 효소의 특이성을 이해한다
2. 효소 특이성을 확인하는 방법과 원리를 숙지한다
실험 원리
효소는 생명체에서 촉매 기능을 갖는 단백질의 일종(전통적인 효소 개념), 즉 생체촉매와 일반 촉매와의 주요 차이점은 정도가 높다는 점이다. 특이성(특이성)이라는 것은 효소가 작용하는 기질에 대해 엄격한 선택성을 갖는다는 것을 의미합니다. 즉, 효소는 하나의 화합물 또는 화합물 클래스(동일한 화학 물질을 사용)에 대해서만 특정 촉매 효과를 나타낼 수 있습니다. 효소 특이성은 효소의 특성 중 하나이지만, 다양한 효소가 나타내는 특이성은 정도가 매우 다르며 구조적 특이성과 구조적 특이성으로 나눌 수 있습니다. 입체이성질체 특이성.
전분과 자당은 모두 비환원당이며 각각 타액 아밀라아제와 수크라아제의 특정 기질입니다. 타액 아밀라아제는 전분을 가수분해하여 환원 맥아당을 생성할 수 있지만 수크라아제는 자당을 가수분해할 수 없습니다. 포도당과 과당을 환원시키지만 전분을 가수분해할 수는 없습니다.
베네딕트 시약은 황산구리와 구연산나트륨을 함유한 탄산나트륨 용액으로, 환원당을 해당 화합물로 산화시킬 수 있는 반면, Cu2+는 Cu+로 환원됩니다. 청색 황산구리 용액은 환원되어 벽돌색의 산화제1구리 침전물을 생성합니다. 따라서 베네딕트 시약을 사용하여 두 효소에 의한 각 기질의 가수분해에 의해 생성된 생성물의 환원 특성을 확인하여 다음과 같은 이해를 심화할 수 있습니다. .
장비 및 시약 (1) 장비 1. 항온 수조
2. 시험관 및 시험관 랙
3. 필터 버킷
4. 피펫
5. 눈금 실린더
6. 비커
7. 원심분리기(2) 시약 1.2% 자당
2.1% 전분(0.3% NaCl 함유)
3. 타액 아밀라아제 용액
먼저 증류수로 입을 헹구고 깨끗한 시험관을 사용하여 복용합니다. 타액(거품 없음) 2ml 정도를 증류수로 20배 희석하여 따로 놓아둔다.
4. 슈크라제 용액
활성건조이스트 1.0g을 취해 절구에 넣는다. , 소량의 증류수와 석영사를 넣고 갈아서 약 10분간 추출한 후 증류수를 넣어 전량 약 20ml 정도가 되도록 여과하거나 원심분리하여 여과액 또는 상층액을 취하여 나중에 사용한다.
5. 베네딕트 시약
무수 CuSO4 17.4g을 100℃ 뜨거운 물에 녹여 식힌 후 150ml로 희석한다. 물 600ml에 구연산나트륨 173g과 무수 Na2CO3 100g을 넣고 가열한다. 용액이 혼탁해지면 여과하고 식힌 후 850ml로 희석한다. 마지막으로 CuSO4 용액을 첨가하고 구연산-Na2CO3 용액에 붓고 혼합한다(이 용액은 장기간 보관 가능).
실험단계
(1) 아밀라아제 특이성
시험관 5개를 취하여 라벨을 붙인 후 표에 나열된 순서대로 조작합니다. 시약 시험관 번호 123 4 51 % 전분 용액(ml) 1.0—1.0—2% 자당 용액(ml)—1.0—1.0—타액 아밀라제(ml)— -1.01.01.0 증류수(ml) 1.01.0 - 1.0 각 튜브에 시약을 첨가한 후, 37℃ 항온수조에 10분간 담근 후 각 튜브에 베네딕트 시약 2ml를 넣고 끓는 수욕조에 5분간 담가 각 튜브의 색변화를 관찰하고 실험을 해석하라. 결과.
(2) 수크라제의 특이성
시험관 5개를 가져다가 라벨을 붙인 후 표에 나열된 순서대로 조작합니다. 시약 시험관 번호 123 451% 전분 용액( ml) 1.0-1.0-2% 수크로스 용액(ml)-1.0-1.0-수크라제(ml)-1.01.01.0 증류수(ml) 1.01.0-1.0 각 튜브에 시약을 첨가한 후 37°C 수조를 10분간 배양한 후 각 튜브에 베네딕트 시약 2ml를 넣고 끓는 수조에 5분간 담가둡니다.
각 튜브의 색 변화를 관찰하고 실험 결과를 설명해주세요.
중요 팁
1. 자당은 대표적인 비환원당입니다.
특정 기준을 초과하면 환원성을 나타내게 되며, 이런 종류의 자당은 사용할 수 없습니다. 일반적으로 실험 전에 사용되는 자당을 확인해야 하며, 최소한 분석적으로 순수한 시약을 사용해야 합니다.
2. 사람이 다르거나 동일하기 때문에 개인에게서 채취한 타액의 아밀라아제 활성도는 동일하지 않고 때로는 매우 다르기 때문에 개인의 타액 아밀라아제 활성도에 따라 타액 희석배수를 조절할 수 있습니다. , 일반적으로 20 ~ 200 배입니다.
3. 제조된 수크라아제 용액에는 일반적으로 환원당 불순물이 소량 포함되어 있으므로 약한 양성 반응이 발생할 수 있으며, 또한 불순물이 함유된 전분과 부분적인 분해가 발생할 수 있습니다. 가열 과정도 약간의 양성 반응을 일으킬 수 있습니다.
4. 타액에는 아밀라아제 외에도 맥아당을 포도당으로 가수분해할 수 있는 소량의 말타아제도 포함되어 있습니다.