식품첨가물에 대한 화학적 검사방법 절차 요청
방부제는 식품이 부패 및 변질되는 것을 방지하고 식품 내 미생물의 번식을 억제하며 식품의 유통기한을 연장시키는 물질을 말합니다. 현재 우리나라에서 사용이 허용된 주요 품종은 안식향산과 그 나트륨염, 소르빈산과 그 칼륨염, 에틸과 프로필 파라히드록시벤조에이트, 프로피온산나트륨, 프로피온산칼슘, 데히드로아세트산 등이다. 1 벤조산과 벤조산나트륨 측정 벤조산과 벤조산나트륨은 현재 우리나라에서 사용되는 주요 방부제 중 하나입니다. 산성형 방부제로 산성 조건에서 방부효과가 더 좋습니다. 특히 산성식품(pH 4.5~5)에 적합합니다. 우리나라의 《식품첨가물 사용위생기준》(GB2760-1996)에서는 탄산음료 중 안식향산과 안식향산나트륨의 최대 사용량을 0.2g/kg으로 규정하고 있으며, 저염 장아찌, 장아찌, 보존식품, 식초, 잼 (통조림 제외)), 과일음료, 비닐포장 농축과채주스 등의 경우, 최대사용량은 2g/kg(안식향산으로 환산)입니다. 1.1 산-염기 적정법 1.1.1 원리: 시료에 포화 염화나트륨 용액을 첨가하고, 알칼리 조건에서 추출한 후, 단백질, 지방 등을 분리한 후 산성화하고, 에테르로 시료 중의 안식향산을 추출한 후 에테르를 첨가한다. 이를 증발시키고 중성 에테르-알코올 혼합물에 용해시킨 후 최종적으로 표준 알칼리 용액으로 적정합니다. 1.1.2 기구 및 시약 (1) 기구 ① 기본 뷰렛. ②300ml 비커. ③250ml 메스플라스크. ④500ml 분액깔대기. ⑤수욕 상자. ⑥헤어드라이어. 7분석적 균형. ⑧ 삼각플라스크. (2) 시약 ① 순수에테르 : 에테르를 증류병에 넣고 수욕상에서 증류하여 35℃ 부분의 증류액을 채취한다. ② 염산(6mol/L). ③수산화나트륨용액(100g/L) : 수산화나트륨 100g을 작은 비이커에 정밀하게 달아 소량의 증류수를 넣어 녹인 후 1000ml 메스플라스크에 옮겨 표시선에 맞춘다. ④염화나트륨포화용액. ⑤순수염화나트륨. ⑥95% 중성에탄올 : 95% 에탄올에 페놀프탈레인 지시약 몇 방울을 첨가한 후 수산화나트륨용액으로 붉은빛을 띌 때까지 중화시킨다. 7중성알코올에테르혼합물 : 디에틸에테르와 에탄올을 1:1로 섞은 후 페놀프탈레인을 지시약으로 하고 수산화나트륨을 넣어 붉은색이 될 때까지 중화한다. ⑧페놀프탈레인 지시약(1% 에탄올 용액) : 중성 에탄올 100ml에 페놀프탈레인 1g을 녹인다. 9수산화나트륨표준액(0.05mol/L) : 순수한 수산화나트륨 약 3g을 달아 소량의 증류수를 가하여 표면을 녹인 후 이 부분을 버리고 남은 수산화나트륨(약 2g)을 끓인다. 이 품목을 후냉각한 증류수에 녹여 1000ml로 하고 다음 방법에 따라 농도를 보정한다. 1.1.3 조작순서 (1) 시료처리 ① 고체 또는 반고체 시료 : 분쇄한 시료 100g을 달아 250ml 메스플라스크에 넣고 증류수 300ml를 넣은 후 분석등급의 염화나트륨을 불용성이 될 때까지 첨가한다(만들기). 포화), 이어서 100g/L 수산화나트륨용액을 사용하여 알칼리성으로 만들고(리트머스 시험지) 잘 흔들어 섞은 후 포화염화나트륨용액을 표시선까지 넣고 2시간 방치(계속 흔들어 섞음)한 후 여과하여 첫 번째 것을 버린다. 여액 10ml를 채취하여 측정용 여액을 채취한다. ② 알코올 함유 검체 : 검체 250ml를 취하여 수산화나트륨용액 100g/L를 가하여 알칼리성으로 만든 후 수욕상에 놓아 약 100ml로 증발시킨 후 250ml 메스플라스크에 옮기고 염화나트륨 30g을 가하고, 흔들어 녹인 후 표시부에 포화염화나트륨시액을 넣고 잘 흔들어 섞은 후 2시간 방치(계속 흔든다)하고 여과하고 여액을 취하여 정량한다. ③ 지방함유량이 많은 검체 : 위의 방법으로 제조한 후 여액에 수산화나트륨시액을 가하여 알칼리성으로 만든 후 에테르 20~50ml를 가하여 추출하고 3분간 흔들어 방치한 후 층분리한 후 용액을 측정에 사용합니다. (2) 위에서 조제한 검체여액 100ml를 추출하여 취하여 250ml 분액깔대기에 옮기고 6mol/L 염산을 산성이 될 때까지 가한다(리트머스 시험). 염산(6 mol/L) 3ml를 가한 후 순수에테르 40, 30, 30ml를 차례로 사용하고 회전법을 이용하여 조심스럽게 추출한다. 매번 5분 이상 흔들어주세요. 분리를 위해 방치한 후 추출물을 또 다른 250ml 분별깔때기로 옮긴다(3회 추출된 에테르층은 모두 이 분별깔때기로 확대된다).
최종 세척액이 더 이상 산성이 아닐 때까지 에테르 추출물을 증류수(매회 10ml)로 세척합니다(리트머스 종이 테스트). 이 에테르 추출물을 삼각 플라스크에 넣고 40~45°C 수조에서 에테르를 회수합니다. 소량의 에테르만 남게 되면 재활용을 중단하고 남은 에테르를 팬으로 불어 건조시켜주세요. (3) 추출물에 중성알코올에테르혼합물 30ml, 증류수 10ml, 페놀프탈레인 지시약 3방울 및 수산화나트륨표준액 0.05mol/L를 가하여 약간 붉어질 때까지 적정한다. 4) 결과 계산 1.2 고성능 액체 크로마토그래피 이 방법은 벤조산과 소르브산을 동시에 측정하는 데 사용할 수 있습니다. 1.2.1 원리: 시료를 가열하여 이산화탄소와 에탄올을 제거하고 pH를 중성에 가깝게 조정한 후 여과한 후 고성능 액체 크로마토그래피에 공급하여 역상 크로마토그래피로 분리한 후 정성 및 정량 분석을 수행합니다. 머무름 시간과 피크 면적을 기준으로 합니다. 1.2.2 기기 및 시약 (1) 기기 : 고성능 액체 크로마토그래프(UV 검출기 포함). (2) 시약 ①메탄올 : 순수등급, 멤브레인(0.5μm)을 통해 여과. ② 묽은암모니아용액(1·1) : 암모니아와 물을 같은 양으로 섞는다. ③초산암모늄용액(0.02mol/L) : 초산암모늄 1.54g을 달아 물 1000ml를 가하여 녹인 후 여과막(0.45μm)으로 여과한다. ④중탄산나트륨용액(20g/L) : 중탄산나트륨(순수우수등급) 2g을 달아 물 100ml를 넣고 흔들어 녹인다. ⑤ 안식향산표준원액 : 안식향산 0.1000g을 정밀히 달아 중조용액(20g/L) 5ml를 가하여 가열하여 녹인 후 100ml 메스플라스크에 옮기고 물을 넣어 100ml로 한 후 잘 흔들어 섞는다. . 이 용액에는 ml당 1mg의 벤조산이 포함되어 있습니다. ⑥소르빈산표준원액 : 소르빈산 0.1000g을 정밀히 달아 중탄산나트륨용액(20g/L) 5ml를 가하여 가열하여 녹인 후 100ml 메스플라스크에 옮기고 물을 넣어 100ml로 한 후 잘 흔들어 섞는다. 이 용액에는 밀리리터당 1mg의 소르빈산이 포함되어 있습니다. 7 안식향산·소브산 표준혼합액 : 안식향산 및 소브산 표준원액 각 10.0ml를 취하여 100ml 메스플라스크에 넣고 표시선까지 물을 넣는다. 이 용액은 벤조산과 소르빈산을 각각 0.1mg/ml 함유하고 있으며, 필터막(0.45μm)을 통해 여과됩니다. 1.2.3 조작순서 (1) 시료처리 ① 소다수 : 시료 5.00~10.0g을 달아 작은 비이커에 넣고 미지근한 온도로 저어 이산화탄소를 제거한 후 암모니아수(1)로 pH를 약 7로 맞춘다. 1). 물을 넣어 10~20ml의 양으로 조절한 후, 멤브레인 필터(0.45μm)로 여과합니다. ② 즙 : 검체 5.00~10.0g을 달아 암모니아수(1·1)로 pH를 7 정도로 조정한 후 적당량에 물을 넣어 원심분리하고 침전시킨 후 상층액을 여과막(0.45μm)으로 여과한다. ③ 와인의 제조 : 시료 10.0g을 달아 작은 비이커에 넣고 수욕에서 가열하여 에탄올을 제거한 후 암모니아수(1-1)로 pH를 약 7로 맞춘 후 물을 첨가하여 100도가 되도록 맞춘다. 적당량을 여과막(0.45μm)으로 여과합니다. (2) 고성능 액체 크로마토그래피 분석을 위한 기준 조건 ①컬럼: YWG-C18 4.6mm×150mm 5μm 또는 기타 모델 C18 컬럼. ②이동상: 메탄올 암모늄 아세테이트 용액(0.02mol/L)(5 95). ③유량: 1.0ml/min. ④주입량 : 10μL. ⑤검출기: UV 검출기, 파장 230nm, 감도 0.2AUFS. 정성적 분석은 머무름 시간을 기준으로 하고, 정량 분석은 외부 표준 피크 면적법을 사용합니다. 1.2.4 결과 계산 공식에서: 시료 희석제의 총 부피, ml - 시료 질량, g. 2 소르빈산과 소르빈산칼륨의 결정 소르빈산과 소르빈산칼륨은 국제적으로 인정된 안전한 방부제이며 많은 국가와 지역에서 널리 사용되고 있습니다.
우리나라의 식품첨가물 사용 위생표준(GB2760-1996)에서는 육류, 생선, 가금류 제품에 사용되는 소르빈산과 소르빈산칼륨의 최대 사용 한도가 과일, 야채, 식품에 대해 0.075g/kg으로 규정되어 있습니다. 탄산 음료의 최대 사용량은 0.2g/kg이며, 콜라겐 케이싱, 저염 피클, 보존 식품, 과일 음료, 젤리 등은 0.5g/kg입니다. 과일 및 야채 주스, 젤리, 건어물 제품, 즉석 섭취 가능한 콩 제품, 페이스트리, 빵, 유산균 음료 등은 1.0g/kg입니다. 소르브산과 소르빈산칼륨을 동시에 사용하는 경우 소르빈산 기준 최대사용량을 초과해서는 안 된다. 2.1 티오바르비투르산 비색법의 원리 2.1.1 시료에서 추출된 소르브산과 그 염을 활용하여 황산과 중크롬산칼륨의 산화 하에서 말론디알데히드를 생성합니다. 바르비투르산의 작용으로 붉은색 화합물이 생성됩니다. 이는 말론디알데히드의 농도에 비례하며 파장 530nm에서 최대 흡수를 가지며 이는 Beer의 법칙을 따르므로 비색법으로 측정할 수 있습니다. 2.1.2 기기 및 시약 (1) 기기 ① 모델 721 분광광도계. ②티슈 매셔. ③10ml 비색 튜브. (2) 시약 ① 티오바르비투르산시액 : 100ml 메스플라스크에 티오바르비투르산 0.5g을 정밀히 달아 증류수 20ml를 가한 후 수산화나트륨용액(1mol/L) 10ml를 넣어 균일하게 잘 흔들어 섞는다. 완전히 녹인 후 염산(1mol/L) 11ml를 넣고 물로 표시선까지 희석한다. 이 액은 사용 전 신선하게 조제해야 하며, 조제 후 6시간 이내에 사용하는 것이 가장 좋다. ②중크롬산칼륨-황산혼합물 : 0.1mol/L 중크롬산칼륨과 0.15mol/L 황산을 1:1 비율로 혼합하여 제조한다. ③소르빈산칼륨표준용액 : 소르빈산칼륨 250mg을 250ml 메스플라스크에 정밀히 달아 증류수에 녹인 후 표시선까지 희석하여 1mg/ml 소르빈산칼륨표준액으로 한다. ④소르빈산칼륨표준액 : 소르빈산칼륨표준액 25ml를 250ml 용량플라스크에 정확하게 취하여 눈금까지 희석하고 잘 흔들어 0.1mg/ml의 소르빈산칼륨표준액으로 한다. 2.1.3 조작순서 (1) 시료처리 시료 100g을 달아 증류수 200ml를 넣고 티슈매셔에 넣어 균질액으로 으깬다. 이 균질액 100g에 증류수 200ml를 넣고 1분간 계속해서 으깨어 10g을 250ml 분량으로 만들고 균일하게 흔들어 여과한 후 따로 보관합니다. (2) 소르빈산칼륨 표준곡선을 그리려면 0.0, 2.0, 4.0, 6.0, 8.0, 10.0ml의 소르빈산칼륨 표준용액을 200ml 용량플라스크에 넣고 증류수(0.0, 1.0에 상당)를 넣어 희석한다. , 2.0 및 10.0ml). 3.0, 4.0, 5.0μg/ml 소르빈산칼륨). 그런 다음 해당 10ml 비색관에 2.0ml를 취하고 중크롬산칼륨황산용액 2.0ml를 넣고 100°C 수욕에서 7분간 가열한 후 즉시 티오바르비투르산용액 2.0ml를 넣고 10분간 계속 가열한다. 즉시 냉수로 식혀 분광광도계로 530nm에서 흡광도를 측정하고 표준곡선을 그린다. (3) 검체의 측정 : 검체처리액 2ml를 10ml 비색관에 넣고 "중크롬산칼륨황산용액 2.0ml 첨가"부터 시작하여 표준곡선 작성 조작방법에 따라 측정한다. 흡광도계의 530 nm에서 표준 곡선에서 해당 농도를 찾습니다. 2.1.4 결과 계산 공식에서: X1 - 시료 내 소르빈산칼륨의 함량, g/kg ml; m - 시료에 해당하는 균질액의 질량, g - 시료 용액의 부피 비색법에 사용됨, ml 250 - 시료 처리 용액의 총 부피, ml 1.34 - 소르브산 칼륨으로 변환됨.
2.2 UV 분광광도법 2.2.1 원리 시료를 클로로포름(클로로포름)으로 추출한 후 중탄산나트륨을 첨가하여 소르브산을 소르빈산나트륨으로 만들고 수용액에 용해시킨다. 순수한 소르빈산나트륨 수용액은 254nm에서 최대 흡광도를 가지며, UV 분광광도계로 흡광도를 측정한 후 함량을 측정할 수 있다. 2.2.2 기기 및 시약 (1) 기기 ① UV 분광광도계. ②티슈 매셔. (2) 시약 ① 클로로포름 : 50% 중탄산나트륨(0.5mol/L)을 클로로포름으로 2회 추출한 후 무수황산나트륨으로 건조한 후 여과하여 따로 둔다. ②0.5mol/L 중탄산나트륨 : 작은 비이커에 중탄산나트륨 21g을 달아 소량의 증류수를 넣어 녹인 후 500ml 메스플라스크에 옮기고 눈금에 맞춰 물을 넣어 맞춘다. ③0.3mol/L 중탄산나트륨. ④소르빈산표준용액 : 소브산 250mg을 정밀히 달아 0.3mol/L 중탄산나트륨을 가하여 250ml로 조정한다. ⑤소르빈산표준용액 : 소르빈산표준액 25.00ml를 정확하게 취하여 0.3mol/L 중탄산나트륨을 사용한다. 100μg/ml의 표준액인 250ml로 정한다. 2.2.3 조작단계 (1) 시료처리 : 시료 50.0g을 달아 증류수 450ml를 티슈매셔에 넣고 5분간 분쇄하여 균질화시킨다. 이 균질액 10.0g을 50ml 용량 플라스크에 넣고 물로 채워줍니다. 이 용액 10ml를 250ml 분별깔때기에 취하여 클로로포름 100ml를 넣어 1분간 추출한다. 레이어에 앉아 보자. 클로로포름층을 125ml 삼각플라스크에 나누어 무수황산나트륨 5g을 넣고 흔들어 방치한다. (2) 표준곡선 작성 : 소르브산 표준용액 0.0, 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0ml를 100ml 메스플라스크에 취하고 0.3mol/L 중탄산나트륨(각각 0.0, 1.0에 해당)을 넣어 희석한다. ), 2.0, 3.0, 4.0, 5.0μg/ml 소르브산). UV 분광광도계로 254nm의 흡광도를 측정하고 농도를 가로축, 흡광도를 세로축으로 하는 표준곡선을 그린다. (3) 검체의 정량 : 검체의 클로로포름 추출물 50ml를 125ml 분별깔때기에 넣고 중탄산나트륨(0.3mol/L) 25ml를 넣어 1분간 추출한다. 분리되도록 방치한 후 클로로포름 층을 조심스럽게 폐기합니다. 중탄산나트륨 추출액의 흡광도는 UV 분광광도계를 사용하여 254nm에서 측정하였다. 표준 곡선에서 해당 소르브산 함량을 찾습니다. 2.2.4 결과 계산식: X - 소르브산 함량. g/kg m1 - 시험 용액의 소르빈산 함량, mg/ml V1 - 시료의 중탄산나트륨 추출물의 총 부피, ml V2 - 시료의 클로로포름 추출물의 부피, ml V3 - 시료의 클로로포름 추출 총 액체 부피(ml) - 측정에 사용된 시료 물 추출물은 시료의 질량(g)과 동일합니다. 2.3 가스크로마토그래피 2.3.1 원리 시료를 산성화시킨 후 에테르로 소르빈산과 벤조산을 추출한 후 수소염기이온화검출기를 갖춘 가스크로마토그래프를 이용하여 분리 측정한 후 표준계열과 비교 정량한다. 2.3.2 기기 및 시약 (1) 기기 가스 크로마토그래프(수소 불꽃 이온화 검출기 포함). (2) 시약 ① 디에틸에테르 : 과잉의 산화물을 함유하지 않는다. ②석유 에테르: 끓는점 범위 30~60℃. ③ 염산. ④무수황산나트륨. ⑤ 염산(1:1) : 염산 100ml를 취하여 200ml로 묽힌다. ⑥염화나트륨산성용액(40g/L) : 염화나트륨용액(40g/L)에 소량의 염산(1:1)을 첨가하여 산성화한다. 7소르빈산 및 안식향산표준원액 : 소르빈산 및 안식향산 각 0.2000g을 정밀히 달아 100ml 메스플라스크에 넣고 석유에테르와 디에틸에테르 혼합용매(3:1)를 가하여 녹여 100ml로 한다. 표시 이 용액 1ml는 소르빈산 또는 벤조산 200mg에 해당합니다. ⑧소르빈산 및 안식향산표준용액 : 소르빈산 및 안식향산표준용액 적당량을 취하여 석유에테르-디에틸에테르(3·1) 혼합용매를 가하여 50, 100, 150, 200 당량으로 희석하고, ml 당 250mg 소르브산 또는 벤조산.
2.3.3 조작순서 (1) 시료처리 : 미리 균일하게 혼합한 시료 2.50g을 달아 25ml 마개가 있는 눈금실린더에 넣고 염산(1:1) 0.5ml를 넣어 산성화시킨 후, 에테르 15ml, 10ml를 차례로 넣어 추출할 때마다 1분간 흔들어 준 후 상부 에테르 추출물을 마개가 달린 다른 25ml 눈금실린더에 흡입하고 에테르 추출물을 합한다. 산성염화나트륨용액(40 g/L) 3ml로 2회 씻고 15분간 정치한 후 점적기를 사용하여 에테르층을 무수황산나트륨을 통하여 여과하여 25ml 메스플라스크에 넣고 표시선까지 에테르를 넣어 혼합한다. . 디에틸에테르추출물 5ml를 마개 달린 5ml 눈금 시험관에 정확하게 옮기고 40℃ 수욕상에서 증발건고한 후 석유에테르-디에틸에테르(3:1) 혼합용매 2ml를 가한다. 잔여물을 녹여서 따로 보관해 두세요. (2) 크로마토그래피 기준조건 ① 크로마토그래피 컬럼 : 내경 3mm, 길이 2m의 유리 컬럼에 5%(질량분율) DEGS 1%(질량분율) H3 PO4 고체액체로 코팅된 60-80 mesh ChromosoybWAW를 채웠다. . ②캐리어 가스: 캐리어 가스는 질소이고, 가스 유량은 50ml/min입니다. (질소, 공기, 수소는 각 기기의 모델에 따라 다르므로 각각에 가장 적합한 비율 조건을 선택하십시오.) ③온도: 시료 투입 온도는 230°C, 검출기 온도는 230°C, 컬럼 온도는 170°C입니다. (3) 정량 ① 표준품계열의 각 농도별 표준용액 2 μL를 가스크로마토그래프에 주입하고 농도별 소르빈산과 벤조산의 피크높이를 측정한다. 농도를 가로좌표로, 피크 높이를 세로좌표로 하여 표준곡선을 그립니다. 소르빈산과 벤조산의 표준 크로마토그램은 그림 8-1에 나와 있습니다. 소르빈산의 머무름 시간은 173초이고 벤조산의 머무름 시간은 368초입니다. 그림 8-1 소르브산과 벤조산의 표준 크로마토그램 ② 검액 2 μL를 주입하고 피크 높이를 측정한 후 표준곡선과 비교하여 정량한다. 2.3.4 결과 계산식: 1) 혼합 용매의 부피, ml: V2 - 측정 중에 주입된 시료의 부피, μL - 시료의 질량, g을 곱합니다. 샘플의 벤조산 나트륨 함량을 얻으려면 벤조산의 1.18을 곱하십시오. 3 과아세트산 측정 과아세트산이라고도 하는 과아세트산은 과산화수소, 아세트산 및 미량 황산의 혼합 수용액입니다. 과아세트산은 박테리아 번식체, 포자, 곰팡이 및 바이러스에 대한 높은 살상 효과를 가지며, 광범위하고 효율적이며 빠르게 작용하는 살균제입니다. 3.1 원리 산성조건에서 과아세트산에 함유된 과산화수소(H2O2)를 과망간산칼륨 표준적정용액으로 적정한 후 간접요오드법으로 과아세트산의 함량을 구한다. 3.2 기구 및 시약 3.2.1 기구 ① 250ml 요오드병. ②갈색 뷰렛 50ml. ③분석적 균형. 3.2.2 시약 ① 황산용액(1·9) : 황산 1ml를 달아 물 9ml를 넣어 섞는다. ② 요오드화칼륨용액(100g/L). ③황산망간용액(100g/L). ④몰리브덴산암모늄용액(30g/L). ⑤과망간산칼륨표준용액[c(1/5KMnO4)=0.1mol/L]. ⑥티오황산나트륨 표준적정용액[c(Na2S2O3)-0.1mol/L]. 7전분지시액(10g/L). 3.3 작업 단계: 샘플 약 0.5g(또는 과아세트산을 포함하는 샘플 약 0.07g)을 0.0001g까지 정확하게 계량하고 물 50ml, 황산 용액 5ml 및 황산 용액 5ml가 미리 채워진 용기에 넣습니다. 황산망간시액 3방울을 4℃로 식힌 요오드플라스크에 넣고 잘 흔들어 섞은 후 과망간산칼륨표준용액으로 안정한 연분홍빛이 될 때까지 적정한다.
다음에 요오드화칼륨시액 10ml와 몰리브덴산암모늄시액 3방울을 넣어 가볍게 흔들어 섞은 후 어두운 곳에 5~10분간 방치한 후 종말점(용액)에 가까워지면 티오황산나트륨표준액으로 적정한다. 연한 노란색)에 전분지시액 1ml를 넣고 파란색이 사라질 때까지 적정을 계속하여 30초간 변함없이 유지하여 종말점으로 한다. 소비된 티오황산나트륨 표준 적정 용액의 부피를 기록합니다. 3.4 결과 계산 공식: 시료의 질량, M – 티오황산나트륨 표준 적정 용액(c=1.000mol/L) 1.00ml에 해당하는 과아세트산의 몰 질량(M=0.03803g/mol) 2개의 병렬 측정 결과를 취합니다. 산술 평균은 측정 결과이며 두 개의 병렬 측정 결과 간의 차이는 0.3보다 크지 않아야 합니다. 4 파라벤 측정: 에틸 파라하이드록시벤조에이트, 프로필 파라하이드록시벤조에이트 및 에틸파라벤으로 명명 프로필파라벤과 부틸파라벤. 세 가지 모두 벤조산의 유도체입니다. 우리나라의 "식품첨가물 사용 위생기준"(GB2760-1996)에서는 과일 및 채소 보존에 사용되는 에틸파라벤, 프로필파라벤, 부틸파라벤의 최대 사용량(파라히드록시벤조산으로 계산)이 0.012g/kg이라고 규정하고 있습니다. 0.10g/kg, 탄산음료, 케이크, 달걀 노른자 충전물 0.20g/kg; 과일 음료, 잼(캔 제외), 간장 등 0.25g/kg; 4.1 고성능 액체 크로마토그래피 4.1.1 원리: 시료의 파라벤을 아세토니트릴로 추출하고 여과한 다음 고성능 액체 크로마토그래피로 측정하고, 머무름 시간을 사용하여 식별하고 정량화합니다. 4.1.2 기구 및 시약 (1) 기구 ① 티슈 매셔. ② 원심분리기. ③고성능 액체 크로마토그래프(UV 검출기 포함). (2) 시약 ① 아세토니트릴. 전체 유리 증류. ② 파라벤표준용액 : 해당 파라벤 50mg을 달아 100ml 용량플라스크에 녹인 후 아세토니트릴을 가하여 적당량으로 희석하여 혼합한다. 위 용액을 각각 1.0, 2.0, 3.0, 4.0, 5.0ml씩 피펫팅하여 100ml 메스플라스크에 넣고 아세토니트릴을 가하여 표시선까지 희석한다. 이 표준 용액 시리즈의 각 밀리리터에는 각각 5.0, 10.0, 15.0, 20.0 및 25.0μg의 파라벤이 포함되어 있습니다. 4.1.3 조작순서 (1) 시료추출 : 시료 약 20g을 달아 분쇄한다. 검체 2g을 정확하게 달아 마개가 달린 10ml 원심분리관에 넣고 아세토니트릴 5.0ml를 넣고 관을 막는다. 30초간 흔든 후 500r/min로 5분간 원심분리하고 상층액을 25.0ml 메스플라스크에 옮기고 이 조작을 3회 반복한 후 아세토니트릴로 표시선까지 희석한다. 크로마토그래피 측정을 위해 0.45μm 필터 멤브레인으로 필터링합니다. (2) 고성능 액체 크로마토그래피 분석을 위한 기준 조건 ①컬럼: μBondapak C18 30cm×4.6mm. ②유량: 1.4ml/min. ③검출 파장: 254nm. (3) 파라벤표준품계열의 각 농도별 표준용액 10 μL를 취하여 주입하고 농도를 가로좌표, 피크높이를 세로좌표로 하여 검량선을 그린다. 동시에 시료용액 10 μL를 주입하고 표준곡선과 정성적, 정량적으로 비교하였다. 메틸파라벤과 프로필파라벤의 머무름 시간은 각각 약 4.2분과 7.6분이며, 표준 크로마토그램은 그림 8-2에 나와 있습니다. 4.1.4 결과 계산식에서: , g 25 - 시료 용액의 부피, ml.
4.2 가스크로마토그래피 4.2.1 원리 시료를 산성화한 후 파라벤을 추출하고 에테르로 농축한 후 수소화염이온화검출기가 장착된 가스크로마토그래프를 이용하여 분리, 측정한 후 표준계열과 정량적으로 비교한다. 4.2.2 기기 및 시약 (1) 기기 ①K-D 농축기. ② 가스 크로마토그래프: 수소 불꽃 이온화 검출기가 장착되어 있습니다. (2) 시약 ① 디에틸에테르를 재증류한 것. ②무수에탄올. ③무수황산나트륨. ④ 포화 염화나트륨 용액. ⑤중탄산나트륨용액(1g/100ml). ⑥ 염산(1·1) : 염산 50ml를 취하여 물을 가하여 100ml로 한다. ⑦ 파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산프로필표준액 : 파라옥시안식향산에틸 및 파라옥시안식향산프로필 각각 0.050g을 정밀히 달아 50ml 메스플라스크에 녹인 후 무수에탄올을 가하여 눈금선까지 희석한 액을 에틸 1mg으로 한다. 파라하이드록시벤조에이트, 프로필 에스테르. ⑧ 파라옥시안식향산에틸, 파라옥시안식향산프로필용액 : 파라옥시안식향산에틸, 파라옥시안식향산프로필표준용액 적당량을 취하여 무수에탄올을 가하여 800μg당 50, 100, 200, 400, 600등이 되도록 희석한다. 에틸 및 프로필 파라히드록시벤조에이트. 4.2.3 작업 단계 (1) 시료 추출 및 정제. ① 간장, 식초, 과즙 등 : 균질화한 검체 5g을 125ml 분별깔대기에 넣고 염산(1×1) 1ml를 넣어 산성화시킨 후 포화식염수 10ml를 넣고 잘 흔들어 섞은 후 75ml를 가한다. , 디에틸에테르 각각 50, 50ml를 2분씩 3회 추출하고 잠시 방치한 후 물층을 버리고 에테르층을 250ml 분액깔대기에 넣고 포화염화나트륨용액 10ml를 가하여 1회 세척한다. 그 후 중탄산나트륨용액(1g/100ml)으로 30, 30, 30ml씩 세척하고 3회 세척하여 물층을 버립니다. 여과지를 이용하여 깔때기 입구의 물을 흡수시킨 후 흡수솜으로 막고 무수황산나트륨 10g을 첨가하여 K-D농축기에서 실온에 가깝게 30분간 농축한 후 잔류용매를 제거한다. 질소를 불어 넣습니다. 가스 크로마토그래피를 위해 ml당 1mg의 에틸 및 프로필 파라히드록시벤조에이트를 함유하도록 무수 에탄올로 부피를 희석합니다. ② 잼 : 균질화된 검체 5g을 100ml 마개 시험관에 담고 염산(1×1) 1ml, 포화식염수 10ml를 넣고 잘 흔들어 섞은 후 50, 30, 30ml로 3회 추출한다. 에테르, 매회 2분, 피펫을 사용하여 에테르를 250ml 분별 깔대기로 옮기고 위와 같이 진행합니다. (2) 가스 크로마토그래피 분석을 위한 기준 조건. ① 크로마토그래피 컬럼: 내경 3mm, 길이 2.6m, 내부 코팅 3SE-30/Chromoserb W AWI)-MCS, 60~80 mesh. ②검출 온도: 컬럼 온도 170℃, 입구 및 검출기 온도 220℃. ③가스 유량: 질소, 40ml/분, 수소, 50ml/분, 500ml/분. (3) 정량 : 에틸파라옥시벤조에이트 및 프로필파라옥시벤조에이트 표준품계열의 각 농도별 표준용액 1μL를 가스크로마토그래프에 주입하고, 각 농도별 에틸파라옥시벤조에이트 및 프로필파라옥시벤조에이트의 피크 높이를 측정한다. 농도를 가로좌표로, 피크 높이를 세로좌표로 하여 표준곡선을 그린다. 동시에 시료용액 1 μL를 주입하고 피크 높이를 측정하여 표준곡선과 비교하여 정량화하였다. 4.2.4 결과 계산 공식에서: V2 – 시료 주입량, μL – 시료 질량, g.